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qPCR系列
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產品信息
產品名稱
產品編號
規格
Probe qPCR Mix hUDG熱啟動探針法定量PCR Mix(含抗體修飾熱啟動酶+hUDG)
HRF0071
100T
產品描述
HRbio™ Probe qPCR Mix hUDG 是一款適用于DNA模板(如DNA病毒)的探針法qPCR DNA 聚合酶,以其的定量性被廣泛應用,并能有效的防止污染,核心組分Taq HS DNA Polymerase是基于抗體法修飾,經過升級改造提升模板親和能力的新一代熱啟動DNA聚合酶。
產品組分
Mix 組分
(100T)
5×qPCR Buffer
1000 μL
Probe qPCR Mix hUDG
120 μL
a、內含dUTP 及含鎂離子 buffer.
b、內含 AB-HS Taq DNA polymerase
運輸與保存方法
-20 ℃,保質期1年。
產品特點
1、qPCR反應;
2、高特異性和高靈敏度。
體系配制(以50μL反應體系為例)
組分
體積
10 μL
上游引物(20μM)
0.5μL(variable)
下游引物(20μM)
探針(20μM)
0.25μL(variable)
DNA 模板
30 μL(variable)
Probe AB-HS qPCR Mix
1.2 μL
volume
to 50 μL
注: 1、引物一般在 0.1μM-1μM 之間進行調整,一般情況下引物濃度在 0.2μM可達到理想的檢測效果;
2、探針濃度一般在 50nM-250nM 質檢進行調整;
3、擴增片段的長度一般在 80bp-150bp 之間。
反應條件
步驟
溫度
時間
循環數
檢測熒光
25℃
5min
1
Off
預變性
95℃
3min
變性
15s
45
退火
60℃
30s
On
注:1、預變性時間設置:由于本試劑用到的是抗體修飾酶,需要熱激活處理,一般建議預變性時間設為 95℃,3min。
退火溫度和時間設置:請根據引物的 Tm 值和目的基因的長度進行調整。
結果分析
1.擴增結束無擴增曲線
1)建議加入高濃度和高質量的 DNA 模板確保反轉的成功;
2)引物是否降解,可以通過PAGE 膠確定其完整性;
3)反應循環數不夠,一般將循環數設為 40-45 個循環;
4)確認PCR 程序設置中是否設置了熒光采集過程。
2.CT 值出現過晚
1)反應條件不夠優化,可適當降低退火溫度;
2)模板濃度過低或加樣量不足;
3)PCR 產物過長,一般PCR 產物推薦長度為 80-150bp。
3.陰性對照有明顯擴增
1)Mix 液、ddH2O、引物和探針可能存在污染,更換新的重新進行實驗。
Probe qPCR Mix hUDG熱啟動探針法定量PCR Mix 注意事項
本產品僅供科研用途!
天津天正信達供應:RNA逆轉錄試劑盒、逆轉錄試劑盒、PCR試劑盒 、提取試劑盒、色譜進樣瓶、培養基瓶、試劑瓶、胎牛血清、染色液、試劑瓶、QPCR試劑盒、生物試劑、抗體、瓊脂糖、實驗耗材,我司擁有一支覆蓋生物化學、分子生物學、免疫學等專業人員的研發、構建了儀器設備齊全的實驗技術平臺,主要包括AKTA、高壓均質機、全波長酶標儀、高速落地離心機和qPCR儀等大型儀器設備。
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