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ELISA中試劑:ELISA常用酶辣根過氧化酶(HRP)

更新時間:2025-03-19  |  點擊率:231

  ELISA中試劑:ELISA常用酶辣根過氧化酶(HRP)


  ELISA(酶聯免疫吸附試驗)中,辣根過氧化酶(HRP)是常用的標記酶之一,因其的性質和廣泛的應用優勢而備受青睞。以下是關于HRP在ELISA中的主要特點和應用優勢:

  1. ?HRP的基本特性?

  分子結構?:HRP是一種糖蛋白,由無色的酶蛋白和深棕色的鐵卟啉輔基組成,分子量約為40 kDa?。

  吸收特性?:HRP在403 nm波長處有最大吸收峰,而去輔基的酶蛋白在275 nm波長處有最大吸收?。

  純度與活性?:HRP的純度用RZ值表示,但RZ值僅反映血紅素基團的含量,與酶活性無關。酶活性以單位(U)表示,即1分鐘內將1 μmol底物轉化為產物所需的酶量?。

  2. ?HRP的應用優勢?

  穩定性高?:HRP對熱和有機溶劑較為穩定,易于保存和使用?。

  價格低廉?:與堿性磷酸酶(AP)相比,HRP價格更低,且易于獲得高純度制劑?。

  標記效率高?:HRP在酶標記物制備中得率較高,適合大規模應用?。

  底物多樣性?:HRP可催化多種底物,如四甲基聯苯胺(TMB)、鄰苯二胺(OPD)等,顯色反應靈敏且穩定?。


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  3. ?HRP在ELISA中的具體應用?

  檢測流程?:HRP通常作為二抗的標記酶,通過催化底物顯色反應,將無色信號轉化為顯色產物,用于量化目標抗體水平?。

  底物選擇?:TMB是目前ELISA中常用的HRP底物,因其穩定性好、成色反應無需避光且無致突變作用?。

  反應終止?:HRP的酶促反應可通過強酸或疊氮鈉等終止劑有效終止?。

  4. ?HRP的保存與使用?

  保存條件?:HRP在干燥狀態下于-20°C可長期保持穩定,冷凍保存時需使用甘油、磷酸鈉等基質溶液以維持其活性?。

  使用注意事項?:避免使用疊氮鈉作為防腐劑,因其可能抑制HRP活性?。

  綜上所述,HRP因其高穩定性、低成本、高效標記和廣泛底物適用性,成為ELISA中常用的標記酶之一?。

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